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生物样品扫描电镜基本结构及样品的处理过程
发布时间:2023-05-23   点击次数:16次
   基本结构
  扫描电镜主要是由电子光学系统和显示单元组成,它是由电子枪、磁透镜、扫描线圈以及样品室组成。电子枪与透射电镜的电子枪基本相同,只是加速电压较低,一般在40kV以下。
  磁透镜有第一、二聚光镜和物镜,其作用与透射电镜的聚光镜相同:缩小电子束的直径,把来自电子枪的约30μm大小的电子束经过第一、二聚光镜和物镜的作用,缩小成直径约为几十埃的狭窄电子束。
  这是由于扫描电镜的分辨率主要取决于电子束的直径,所以要尽可能缩小它,为此,物镜还装备有物镜可动光栏和消散器。一个带有扫描电路的偏转线翻通以锯齿波的电流,产生的磁场作用于电子束使它在样品上扫描。
  扫描电镜的真空系统也与透射电镜的真空系统相似,由机械泵、扩散泵、检测系统、管道及阀门等组成。样品室位于镜筒的底部。为了能观察大块样品,样品室是大于透射电镜的。与透射电镜一样,扫描电镜的镜筒也有一套合轴调整装置,但相对比较简单。
  显示系统包括信号的收集、放大、处理、显示与记录部分。显示和记录部分包括两个显像管和照相机。一个显像管是长余辉的,用于观察;另一显像管是高分辨率的、短余辉的,用于照相。
  扫描电镜样品的处理过程:
  主要包括表面清洁、固定、漂洗和脱水等过程,基本上与透射电镜样品的处理方法相似,但也有其特殊之处。
  1. 样品大小 所切取样品比透射电镜样品稍大一些,为8~10mm2,高约5mm。
  2. 清洁表面 清洁表面并充分暴露样品表面。常用清洗液有蒸馏水、生理盐水、缓冲液及含酶的清洗液等。
  3. 固定和脱水 常用的固定方法是戊二醛-四氧化饿双重固定,也可用戊二醛单固定法。
  常用脱水剂是乙醇或丙酮。脱水剂浓度梯度增加,从30%或50%开始至100%进行脱水;易变形样品脱水剂浓度梯度宜缓慢递增。
  4. 样品的干燥 脱水后,需要将样品中的脱水剂彻底挥发干净,即样品干燥。其方法有:空气干燥 、真空干燥、冷冻干燥和临界点干燥。
  5. 样品表面导电处理 用金属镀膜法和组织导电处理技术,一是可增强导电能力,消除荷电效应;二是增加样品表面二次电子发射率,加强讯号,提高图像反差。
  (1)金属镀膜:使样品表面覆盖薄层金属膜,这层薄膜与样品表面的凹凸形态完全一致,使标本表面的形貌得以反映。常用的金属有金、铂、钼、或金/铂、铂/铯合金。镀膜的方法有真空镀膜法和离子溅射法。
  (2)组织导电技术:其目的是为提高导电率克服生物材料的荷电效应,提高样品表面二次电子发射率。组织导电处理也称导电染色,是利用某些金属盐类能与生物材料中的蛋白质、脂类和淀粉等结合,使样品表面离子化,使组织导电性增加;并且提高二次电子的发射率。可用醋酸铀、碘化钾、丹宁酸等处理标本。

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